實時熒光PCR試劑盒的使用注意事項概述

　　實時熒光PCR試劑盒，對PCR產物進行標記跟蹤，實時在線監控反應過程，結合相應的軟件可以對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。熒光定量PCR技術是通過熒光染料或熒光標記的特異性探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時監控反應過程。隨著PCR反應的進行，反應產物不斷累積，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環，收集一次熒光強度信號，這樣就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，結合相應的軟件對產物進行分析，可以得到熒光擴增曲線，計算待測樣品初始模版的量。實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向定量技術的飛躍，運用該項技術，可以對DNA、RNA樣品進行相對定量、定量和定性分析。

　　實時熒光PCR試劑盒概述：

　　1.是采用SYBRGreenI嵌合熒光法進行RealTimePCR的試劑。產品中含有RealTimePCR反應的適濃度SYBRGreenI，進行實驗時，PCR反應液的配制十分方便簡單。

　　2.Buffer經過優化改良，可以抑制非特異性反應，能夠在更廣的范圍內進行準確定量。

　　3.可以在寬廣的定量區域內得到良好的標準曲線，對目的基因進行準確定量、檢測，重復性好，可信度高。

　　4.其中熒光定量MIX中已經添加合適濃度的熒光定量ROX校正染料，實驗時無需額外添加，直接可以進行ROX校正實驗。

　　實時熒光PCR試劑盒注意事項：

　　1.整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進行操作，各區實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區應該配有紫外線殺菌裝置。

　　2.為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。

　　3.每次實驗應該設置陰、陽性對照。

　　4.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。

　　5.試劑盒內所配陰性和陽性對照在*次使用前應全部轉移至標本準備區，并單獨存放。

　　6.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。

　　7.儀器擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。

　　8.ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

　　9.實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。